KPXY204農(nóng)殘速測(cè)試劑原理

    在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物 ( 乙酰膽堿 ) 水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)定 412nm 下的吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

2 、KPXY204農(nóng)殘速測(cè)試劑試劑配制及保存

特別提示：本試劑盒可適用于不同廠家的各種型號(hào)農(nóng)殘檢測(cè)儀及分光分度計(jì)，儀器操作根據(jù)其配套說(shuō)明書方法，農(nóng)殘檢測(cè)方法根據(jù)本試劑盒提供方法操作。

緩沖液： 取 1 包緩沖劑加入 500mL 純凈水中，攪拌溶解制成磷酸緩沖液 (pH 8.0) , 常溫保存。
顯色劑： 取 1 瓶顯色劑加 25mL 磷酸緩沖液溶解，使用時(shí)取 100 μ L 避光、 4 ℃保存。
底 物： 取 1 瓶底物加 12.5mL 蒸餾水溶解，使用時(shí)取 100 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
或 取 1 瓶底物加 2.5mL 蒸餾水溶解 ，使用時(shí)取 20 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
膽堿酯酶 ： 酶制劑無(wú)需配制，可直接取用， 4 ℃保存。

3 、樣品提取

    取 2g 果蔬樣品(塊莖類取 4g )剪成 1cm 左右見方碎片，放入小燒杯(或取樣瓶)中；加入 10mL 緩沖液，振蕩 1min～2min ，倒出提取液，靜置 2min 待測(cè)；

4 、測(cè)試

對(duì)照測(cè)試： 于反應(yīng)瓶中加入 2.5mL 緩沖液， 再分別加入 100 μ L 顯色劑和酶液，混勻，靜置預(yù)反應(yīng) 10min 后加入 100 μ L(或20μL)底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測(cè)試通道， 按儀器“對(duì)照”鍵測(cè)試 1min的吸光度變值 ΔΑ 0 .

樣品測(cè)試： 于反應(yīng)瓶中加入 2.5 mL 待測(cè)液， 其他操作與對(duì)照測(cè)試相同，測(cè)試 1 min的吸光度變化值 ΔΑ t .

結(jié)果判定： 以分光光度計(jì)測(cè)試 (412 nm 波長(zhǎng) ) 時(shí)，按以下公式計(jì)算出抑制率 : 抑制率 (%)=[( ΔΑ 0 －ΔΑ t )/ ΔΑ 0 ]×100 ；以農(nóng)殘檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)其抑制率一般可自動(dòng)計(jì)算。若樣品抑制率≥50%，表示被測(cè)果蔬農(nóng)殘超標(biāo)，為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需做 2 次以上重復(fù)檢測(cè)，多次檢測(cè)仍呈陽(yáng)性需用氣相色譜等儀器做進(jìn)一步確認(rèn)。

小提示 1 ： 本試劑盒可在常溫條件下進(jìn)行檢測(cè)，并可以滿足 GB/T 5009.199-2003 方法的要求。采用國(guó)標(biāo)方法時(shí)，預(yù)反應(yīng)時(shí)間為 15 min ，條件為 3 7℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱；測(cè)試反應(yīng)時(shí)間為3 min. 其余與上述方法相同。

小提示 2 ： 檢測(cè)時(shí)對(duì)照與樣品可同時(shí)檢測(cè)，而無(wú)需將兩者分開兩次檢測(cè)，每批檢測(cè)的時(shí)間應(yīng)控制*，否則不具有可比性。

小提示 3 ： 底物的使用量根據(jù)配制時(shí)的體積決定，若稀釋成 12.5mL/瓶，則使用時(shí)加入100μL；若稀釋成2.5mL/瓶，則使用時(shí)加入20μL；國(guó)標(biāo)方法中底物的使用量100μL.

小提示 4 ： 在加底物的環(huán)節(jié)中，可預(yù)先將底物加入比色杯，待靜置時(shí)間一到，馬上將反應(yīng)瓶中的反應(yīng)液倒入已經(jīng)加有底物的比色杯，并迅速放入測(cè)試通道進(jìn)行測(cè)試。這樣可以減少同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)因加底物時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而造成的誤差。

5 、注意事項(xiàng)：

    保存：試劑盒包含緩沖劑 10 包，膽堿酯酶 10 瓶，顯色劑 2 瓶，底物 4 瓶，可供 500 份樣品測(cè)試；使用前整盒試劑應(yīng)保存 4 ℃冰箱，保質(zhì)期 12 個(gè)月；室溫或常溫保存時(shí)，保質(zhì)期 3~6 個(gè)月。 
    使用：任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開一瓶，用完后才使用新的，防止變質(zhì)。 
    器具原則：任何用于移液的器具和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽，單獨(dú)使用，以免交叉污染。
    試劑只出不入原則：測(cè)試時(shí)，從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。

6 、的特點(diǎn)

( 1 )良好的穩(wěn)定性：在 4 ℃條件下可以保存至少一年，常溫條件下保質(zhì)期可長(zhǎng)達(dá) 3 個(gè)月；
( 2 )專業(yè)化的制備技術(shù)：酶試劑調(diào)配成直接取用的液體狀態(tài)，為用戶減少稀釋酶液的麻煩及不確定因素；
( 3 )打破傳統(tǒng)方法所需的苛刻條件的限制：酶試劑可在常溫下直接使用(而無(wú)需 37 ℃條件)，使操作更加簡(jiǎn)便快捷，并大大降低檢測(cè)設(shè)備的成本；
( 4 )檢測(cè)結(jié)果靈敏：zui低檢測(cè)限可達(dá) 0.1mg/kg 以下，對(duì)甲胺磷及樂斯本等常見農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于 0.8mg/kg ，優(yōu)于相關(guān)國(guó)家國(guó)準(zhǔn)要求；
( 5 )抗干擾性強(qiáng)：對(duì)芹菜、辣椒、韭菜等辛辣樣品同樣可檢測(cè)，不易受其植物次生物質(zhì)的干擾；
( 6 )通用性：可以適用于同功能的幾乎所有型號(hào)的檢測(cè)儀器；
( 7 )樣品處理及檢測(cè)過(guò)程總時(shí)間不超過(guò) 15 min ，大量檢測(cè)時(shí)每均每個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間低于 5 min, 大大加快了檢測(cè)速度，節(jié)省檢測(cè)時(shí)間。 
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